色譜柱的性能確認(rèn)（也叫柱性能驗(yàn)證、柱效測(cè)試、柱性能評(píng)價(jià)）是色譜分析工作中一個(gè)嚴(yán)肅且關(guān)鍵的質(zhì)量保證環(huán)節(jié)。其目的是驗(yàn)證色譜柱分離能力、理論塔板數(shù)、峰型和重現(xiàn)性等指標(biāo)，確保符合分析要求。下面系統(tǒng)介紹液相色譜（HPLC）為主的色譜柱性能確認(rèn)方法，如果是氣相色譜柱原理類似。

一、為何要進(jìn)行柱性能確認(rèn)

新柱使用前檢驗(yàn)柱子質(zhì)量（有無出廠缺陷）

排查分離問題是系統(tǒng)還是柱子的原因

長期使用過程中的狀態(tài)監(jiān)控

符合儀器/實(shí)驗(yàn)室SOP、法規(guī)要求，保障結(jié)果可靠（實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可如CNAS、GLP等會(huì)特別強(qiáng)調(diào)）

二、常見性能參數(shù)及意義

理論塔板數(shù)（N）

衡量柱效高低，N值越高分離能力越強(qiáng)，單位長度塔板數(shù)又稱為柱效（plates/m）。

公式：N = 16 (tR / W)^2

其中tR為峰保留時(shí)間，W為峰寬（基線寬度）。

或：N = 5.54 (tR / W1/2)^2，W1/2為半高寬。

分離度（Rs）

反映兩個(gè)相鄰峰分得有多開。

公式：Rs = 2 (tR2 - tR1)/(W1 + W2)

≥1.5為完全分離。

對(duì)稱因子（As）/尾峰因子

衡量峰型（理想值接近1，1.0~1.3為佳）。

保留時(shí)間重復(fù)性

用標(biāo)準(zhǔn)樣品多次進(jìn)樣，RSD應(yīng)小于一定標(biāo)準(zhǔn)。

三、柱性能確認(rèn)的典型方法

1. 制備標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試溶液

選取廠家推薦或行業(yè)通用的標(biāo)準(zhǔn)物：

常見有苯酚、甲苯、甲基苯、安替比林、苯甲酰苯胺等。

節(jié)約版可用尿嘧啶、對(duì)硝基苯酚等。

環(huán)宇A(yù)gilent、Waters等廠家常在出廠報(bào)告注明推薦測(cè)試物和濃度、流動(dòng)相組成和流速。

2. 按推薦色譜條件進(jìn)樣分析

按廠家方法配流動(dòng)相、設(shè)流速、柱溫、紫外檢測(cè)波長等。

流動(dòng)相需新鮮、儀器預(yù)平衡、避免死體積影響。

進(jìn)樣量和樣品濃度適宜，確保峰達(dá)到基線分離。

3. 計(jì)算關(guān)鍵參數(shù)

記錄所有色譜峰的保留時(shí)間、峰寬、峰面積

按上面的公式分別計(jì)算N、Rs、As等參數(shù)。

4. 與標(biāo)準(zhǔn)要求比較

廠家說明書或?qū)嶒?yàn)室SOP會(huì)給出合格的參數(shù)范圍：

如“理論塔板數(shù)≥8000” “分離度≥1.5” “對(duì)稱因子1.0~1.5”

不合格需做進(jìn)一步檢修或更換色譜柱。

四、舉例說明

[例1] 反相C18柱性能確認(rèn)

標(biāo)準(zhǔn)液：苯酚、甲苯、苯胺混標(biāo)

流動(dòng)相：70%甲醇+30%水（體積比）

流速：1.0 mL/min

檢測(cè)：UV 254 nm

柱溫：25°C

操作：

用上述條件上機(jī)進(jìn)樣，獲得色譜圖。

記錄苯酚、甲苯等的tR、W、W1/2。

計(jì)算N、Rs、As。

對(duì)比說明書要求，判斷是否合格。

[例2] 制藥分析實(shí)驗(yàn)室柱效測(cè)試（SOP片段）

取約10 μg/mL 苯酚溶液，進(jìn)樣5 μL，記錄主峰tR與基線寬度。

計(jì)算N = 16 (tR/W)^2，要求N > 10 000。

計(jì)算對(duì)稱因子As，應(yīng)在0.9~1.3。

Rs用相鄰峰，要求>1.5。

五、注意事項(xiàng)

測(cè)試用流動(dòng)相、標(biāo)準(zhǔn)液需新配，避免舊液對(duì)柱子污染

上機(jī)前系統(tǒng)應(yīng)清空并平衡

需用廠家推薦的條件，非自創(chuàng)條件（便于和合格標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照）

形成書面記錄，便于質(zhì)量回溯

六、常見異常與處理

保留時(shí)間明顯偏移——系統(tǒng)死體積、流動(dòng)相變化、柱溫未控

理論塔板數(shù)降低——柱子污染、老化、裝填不良，應(yīng)反沖洗或更換

峰形變差或前后拖尾——進(jìn)樣系統(tǒng)/連接頭死體積、柱損傷